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小鼠活體成像實驗

更新時間:2022-07-15      點擊次數(shù):1607

小動物活體成像 主要采用生物發(fā)光(bioluminescence)與熒光(fluorescence)兩種技術(shù)。生物發(fā)光是用熒光素酶(Luciferase)基因標記細胞或DNA,而熒光技術(shù)則采用熒光報告基團(GFP、RFP, Cyt及dyes等)進行標記。

技術(shù)應用(小鼠活體成像實驗

通過活體動物體內(nèi)成像系統(tǒng),可以觀測到疾病或癌癥的發(fā)展進程以及藥物治療所產(chǎn)生的反應,并可用于病毒學研究、構(gòu)建轉(zhuǎn)基因動物模型、siRNA研究、干細胞研究、蛋白質(zhì)相互作用研究以及細胞體外檢測等領(lǐng)域。具體應用如下:

1.  標記細胞

(1)
癌癥與抗癌藥物研究

直接快速地測量各種癌癥模型中腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移,并可對癌癥治療中癌細胞的變化進行實時觀測和評估?;铙w生物發(fā)光成像能夠無創(chuàng)傷地定量檢測小鼠整體的原位瘤、轉(zhuǎn)移瘤及自發(fā)瘤。

(2)
免疫學與干細胞研究

將熒光素酶標記的造血干細胞移植入脾及骨髓,可用于實時觀測活體動物體內(nèi)干細胞造血過程的早期事件及動力學變化。有研究表明,應用帶有生物發(fā)光標記基因的小鼠淋巴細胞,檢測放射及化學藥物治療的效果,尋找在腫瘤骨髓轉(zhuǎn)移及抗腫瘤免疫治療中復雜的細胞機制。應用可見光活體成像 原理標記細胞,建立動物模型,可有效的針對同一組動物進行連續(xù)的觀察,節(jié)約動物樣品數(shù),同時能更快捷地得到免疫系統(tǒng)中病原的轉(zhuǎn)移途徑及抗性蛋白表達的改變。

(3)
細胞凋亡

當熒光素酶與抑制多肽以融合蛋白形式在哺乳動物細胞中表達,產(chǎn)生的融合蛋白無熒光素酶活性,細胞不能發(fā)光,而當細胞發(fā)生凋亡時,活化的caspase-3在特異識別位點切割去掉抑制蛋白,恢復熒光素酶活性,產(chǎn)生發(fā)光現(xiàn)象,由此可用于觀察活體動物體內(nèi)的細胞凋亡相關(guān)事件。

2.  標記病毒

(1)病毒侵染

以熒光素酶基因標記的HSV-1病毒為例,可觀察到HSV-1病毒對肝臟、肺、脾及淋巴結(jié)的侵和病毒從血液系統(tǒng)進入神經(jīng)系統(tǒng)的過程。多種病毒,腺病毒,腺相關(guān)病毒,慢病毒,乙肝病毒等,已被熒光素酶標記,用于觀察病毒對機體的侵染過程。

(2)基因治療

基因治療包括在體內(nèi)將一個或多個感興趣的基因及其產(chǎn)物安全而有效的傳遞到靶細胞??蓱脽晒馑孛富蜃鳛閳蟾婊蛴糜谳d體的構(gòu)建,觀察目的基因是否能夠在試驗動物體內(nèi)持續(xù)高效和組織特異性表達。這種非侵入方式具有容易準備、低毒性及輕微免疫反應的優(yōu)點。熒光素酶基因也可以插入脂質(zhì)體包裹的DNA分子中, 用來觀察脂質(zhì)體為載體的DNA運輸和基因治療情況。


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